Técnicas de hibridación - Técnica Southern Blot

"El polimorfismo SINE revela distintas cepas de Entamoeba histolytica del norte de la India"

Análisis con cebadores a partir de secuencias flanqueantes de copias de EhSINE1 y EhSINE2 obtenidas de la base de datos de E. histolytica. 

1) Obtención de muestra: quistes de una muestra fecal. 2) Digestión de ADN: con una sonda HMe (ECORI þ Hind III). 3) Electroforesis: fragmentos de ADN en gel de agarosa, para que inicien su migración. 4) Peparación de un ensayo Southern: se coloca ADN por triplicado en la membrana de nylon GS þ presaturada en Tris-Cl 0,4 M, pH 7,5. 5) Hibridación: a 65 °C en un tampón de hibridación con sondas de ADN específicas de locus. 6) Resultados: A través de autoradiografía se observa las muestras positivas para E. histolytica o E. dispar debido a la presencia de EhSINE en cada locus.

Bibliografía:

1) Sharma S, Banyal N, Singh M, Mandal A, Bhattacharya S, Paul J. SINE polymorphism reveals distinct strains of Entamoeba histolytica from North India. PubMed [Internet]. 2017 [citado 9 enero 2022]. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28131659/