Técnicas de hibridación - Técnica Southern Blot

"El polimorfismo SINE revela distintas cepas de Entamoeba histolytica del norte de la India"

Análisis con cebadores a partir de secuencias flanqueantes de copias de EhSINE1 y EhSINE2 obtenidas de la base de datos de E. histolytica. 

1) Obtención de muestra: quistes de una muestra fecal. 2) Digestión de ADN: con una sonda HMe (ECORI þ Hind III). 3) Electroforesis: fragmentos de ADN en gel de agarosa, para que inicien su migración. 4) Peparación de un ensayo Southern: se coloca ADN por triplicado en la membrana de nylon GS þ presaturada en Tris-Cl 0,4 M, pH 7,5. 5) Hibridación: a 65 °C en un tampón de hibridación con sondas de ADN específicas de locus. 6) Resultados: A través de autoradiografía se observa las muestras positivas para E. histolytica o E. dispar debido a la presencia de EhSINE en cada locus.

Bibliografía:

1) Sharma S, Banyal N, Singh M, Mandal A, Bhattacharya S, Paul J. SINE polymorphism reveals distinct strains of Entamoeba histolytica from North India. PubMed [Internet]. 2017 [citado 9 enero 2022]. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28131659/

Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

"Detección de Escherichia coli de alimentos indios basada en
PCR específica para especies"

Para confirmar la presencia de E. coli se realiza la amplificación de ADN usando PCR multiplex a través de la extracción de una colonia de cultivos con dos cebadores específicos para E. coli  (uspA y uidA) . Se realiza el siguiente programa: 94 ° C durante 5 min, 35 ciclos de recocido a 55,2 ° C durante 10 s: 1) Extensión: 72 ° C por 1 min. 2) Desnaturalización: 94 ° C por 10 s. 3) Extensión final: 72 ° C por10 min en el termociclador. El ADN amplificado (5μL por carril) se corre en gel de agarosa (2% a 70 V kte) y se visualiza bajo luz UV.

Pasos para realizar PCR multiplex:

Bibliografía:

1) Pansare L, Bandekar J, Shashidhar R. Species specific PCR based detection of Escherichia coli from Indian foods. PMC [Internet]. 2017 [citado 23 diciembre 2021]. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5453913/

Extracción de ácido nucleico

"Extracción de ácidos nucleicos sin equipo eléctrico mediante nanopartículas magnéticas en pipetas Pasteur para la detección de patógenos"

La extracción de ácidos nucleicos conlleva: 1) Lisis celular: Se añade la muestra y la suspensión en un tampón de lisis con sustancias químicas: Tris, EDTA, proteinasa K y Trixton X-100. 2) Aislamiento: Proceso mecánico, la mezcla se aspira  de arriba hacia abajo con una pipeta para retirar los contaminantes, se elimina el líquido sobrante y se recoge con un imán las MNP. 3) Purificación: El ácido nucleico absorbido en las MNP se eluye en agua libre de nucleasas, que posteriormente se recoge y se realiza plantillas para la amplificación. 4) Análisis. 

Para conocer más sobre el proceso de extracción de ácidos nucleicos, observa el siguiente video:

Bibliografía:

1. Kang J, Li Y, Zhao Y, Wang Y, Ma C, Shi C. Nucleic acid extraction without electrical equipment via magnetic nanoparticles in Pasteur pipettes for pathogen detection. PubMed [Internet]. 2021 [citado 16 Diciembre 2021]. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34740597/

Normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de Biología Molecular

Las normas de bioseguridad contribuyen a la realización de prácticas seguras, orientan y protegen a la comunidad. Las más importantes son:

1) Usar equipo de protección personal

2) Clasificar y rotular el material contaminado en depósitos comunes, infecciosos, cortopunzantes y especiales.

3) Lavarse las manos correctamente antes y después de la práctica.

Bibliografía:

- Hurtado A, Santos J, Manzanares S, Machuca G. Cumplimiento de las Normas de Bioseguridad en los Laboratorios de la Universidad Técnica de Machala. Revista de la Salud [Internet]. 2021 [citado 9 Diciembre 2021]; 3 (3). Disponible en: https://acvenisproh.com/revistas/index.php/masvita/article/view/230/260

- Piguave I, Guanuche L, Pincay M, Mera A. Conocimientos y uso de las normas de bioseguridad en estudiantes del área de salud de una Universidad Ecuatoriana. Dom. Cien. [Internet]. 2020 [citado 9 Diciembre 2021]; 6(4): 254 - 269. Disponible en: https://dominiodelasciencias.com/ojs/index.php/es/article/view/1621/3100

Mensaje de bienvenida

¡Nuestra mayor debilidad radica en renunciar, la forma más segura de tener éxito es siempre intentando una vez más! -Thomas Edison

¡Hola! mi nombre es Daina Brito, soy estudiante de la carrera de Medicina de la Universidad Central del Ecuador y te doy la bienvenida a mi blog. 

Construiré este espacio educativo con el objetivo de compartir nuevos conocimientos referentes a Biología Celular y Molecular; progresivamente podrás encontrar información de gran importancia que será muy útil para tu formación académica médica. 

A continuación podrás conocer un poco más sobre mí: